Pada tahun 1938, seorang kolektor seni meminta bantuan arkeolog terkemuka, Dr. Indiana Jones, untuk memulai pencarian cawan suci tersebut. Indy mengetahui bahwa seorang ahli sejarah abad pertengahan telah menghilang saat mencarinya, dan orang yang hilang tersebut adalah ayahnya sendiri, Dr. Henry Jones Sr. Ia berusaha menyelamatkan ayahnya dengan mengikuti petunjuk di buku catatan milik lelaki tua tersebut, yang dikirimkan ayahnya sebelum ia menghilang. Indy tiba di Venesia, di mana ia meminta bantuan seorang akademisi cantik, Dr. Elsa Schneider, bersama dengan Marcus Brody dan Sallah. Bersama-sama, mereka harus menghentikan kaum Nazi untuk mendapatkan kembali kekuatan kehidupan abadi dan menguasai dunia!